Isabel de Portugal nacó el 24 de octubre de 1503 en Lisboa. Ella fue hija del Rey Manuel I de Portugal y de María de Aragón y Castilla.
El 10 de marzo de 1526 se casó con Carlos I de España, teniendo 23 años. La boda tuvo lugar en los Reales Alcázares de Sevilla y su matrimonio duró 12 años. Durante este tiempo fue emperatriz del Sacro Imperio Romano Germánico. Además fue mucho más que solo una esposa para Carlos: fue la madre de sus hijos y guardó del hogar familiar. Durante sus ausencias fue la colaboradora en las tareas del Estado.

Por otro lado la emperatriz tenía una mala salud que fue aumentado por sus partos. Ella dio a luz a 5 hijos pero también tenía dos abortos. Se puede decir que solo tenía descanso de ser embarazado durante las ausencias de Carlos. Pero en estas ausencias fue muy triste y sufró mucho lo que no ayudaba a su mala salud.

En fin el 1 de marzo de 1539 Isabel tenía un aborto y como consecuencia murió. Eso significaba un dolor grave para Carlos V, aunque solo dejaba escapar sus sentimientos hacia su hermana.